Département de Pharmacie

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Activation des lymphocytes T cytotoxiques antitumoraux par des ligands antigéniques non naturels : approches pharmacologique et structurale
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1999-01-29) MAFIA, AYYOUB
Les cellules tumorales portant des antigènes de tumeur peuvent être reconnues et lysées par les lymphocytes T cytotoxiques (CTL). Ces antigènes sont des peptides de 8 à 11 acides aminés présentés à la surface des cellules tumorales par les molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de classe I. Ils représentent des agents thérapeutiques potentiels en immunothérapie antitumorale. Cependant, leur sensibilité aux peptidases et/ou leur faible immunogénicité peuvent limiter leur utilisation. Le but du travail était double : i) élucider les mécanismes de dégradation des antigènes dans les milieux biologiques et comprendre les paramètres impliqués dans la présentation des peptides antigéniques par le CMH. ii) sur la base de ces connaissances, concevoir des analogues non naturels de ces antigènes.Deux approches rationnellês ont été développées en utilisant comme modèle l'antigène tumoral humain MAGE-1.A1 exprimé dans le mélanome et d'autres tumeurs mais pas dans les tissus sains. Dans la première approche, la compréhension des mécanismes de dégradation du peptide MAGE-1.A1 nous a permis de concevoir des analogues portant des modifications structurales minimales mais suffisantes pour conférer la résistance aux peptidases (tin > 24 heures) sans altérer l'antigénicité du peptide. La deuxième approche est basée sur la connaissance des paramètres de liaison de MAGE-1.A1 au CMH qui nous ont permis de synthétiser des analogues ayant de meilleures propriétés de liaison. Nous avons montré qu'il était possible en utilisant des modifications de la structure de MAGE-1.A1 de lui conférer de nouvelles propriétés, dans le but de l'utiliser comme agent thérapeutique, sans modifier sa spécificité antigénique. Nos résultats sont également discutés en terme d'application en immunothérapie antitumorale.
Altérations de la motricité colique et de la sensibilité viscérale dans la colite expérimentale chez le rat.Approches pharmacologiques.
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1994) Morteau, Olivier
Les colites chez l'homme se traduisent par des lésions organiques et des anomalies fonctionnelles incluant une altération de la motricité colique et une exacerbation de la sensibilité viscérale. Notre objectif était d'adapter des modèles animaux reproduisant ces troubles fonctionnels, afin d'en étudier les médiateurs biochimiques. L'étude, basée sur la mesure par électromyographie de la motricité colique in vivo chez le rat, décrit les troubles de la motricité du côlon proximal en réponse à une inflammation par l'acide trinitrobenzène sulfonique (TNB). L'utilisation d'inhibiteurs de la synthèse et d'antagonistes des récepteurs des principaux médiateurs de la colite montre l'implication du platelet-activating factor (PAF) et de l'interleukine-1 (IL-1) dans ces altérations. Nous définissons ensuite un modèle de douleur viscérale basé sur la distension rectale, induisant d'une part une inhibition amont de la motricité colique, d'autre part une augmentation des contractions des muscles de l'abdomen. L'inflammation rectale par le TNB génère une hypersensibilité caractérisée par un abaissement du seuil d'apparition des deux réponses à la distension. L'administration périphérique d'antagonistes des récepteurs 5-HT3 de la 5-hydroxytryptamine (5-HT) révèle que les récepteurs 5- HT3 participent à la fois aux altérations motrices induites par la distension et à l'hypersensibilité viscérale générée par le TNB. L'injection intrapéritonéale du précurseur de la 5-HT induit une augmentation de la réponse abdominale douloureuse à la distension rectale, permettant l'étude du rôle des autres récepteurs de la 5-HT (5-HT1, 5-HT2, 5-HT4) dans l'hypersensibilité viscérale. En conclusion, les troubles moteurs associées à la colite expérimentale chez le rat impliquent certains des médiateurs (PAF, IL-1) responsables des lésions organiques. Toutefois, d'autres médiateurs n'intervenant pas directement dans la colite, comme la 5-HT, participent à l'hypersensibilité viscérale induite par une rectocolite, via les récepteurs 5-HT3 dans le cas de la 5-HT.
ALTERATIONS DES ADRENOCEPTEURS INTESTINAUX AU COURS DE L'ILEITE EXPERIMENTALE CHEZ LE COBAYE.CARACTERISATION, RÉGULATION PHYSIOPATHOLOGIQUE ET PHARMACOLOGIE FONCTIONNELLE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1997-04-02) MARTINOLLE, Jean-Pierre
Les Maladies Inflammatoires Chroniques de l'Intestin (MICI) sont associées à des troubles moteurs intestinaux. L'importance du système adrénergique dans la régulation de la motricité digestive, ainsi que les altérations structurales et fonctionnelles affectant ce système au cours des MICI, suggèrent qu'une modification des populations, de l'affinité ou de la fonction contractile des adrénocepteurs intestinaux pourrait contribuer à ces troubles moteurs physiopathologiques. Afin de tester cette hypothèse, nous avons développé et caractérisé de façon cinétique, un modèle expérimental de jéjuno-iléite, susceptible de reproduire chez le cobaye l'environnement inflammatoire observé dans les MICI humaines. (1). L'inflammation intestinale, induite par l'instillation intraluminale d'acide trinitrobenzène sulfonique (TNBS), s'accompagne d'une diminution du poids corporel des animaux et de leur prise alimentaire, de modifications importantes de l'intégrité de la paroi et de l'infiltration de la muqueuse par les immunocytes mono et polynucléés. (2). Par l'utilisation de radioligands adrénergiques sélectifs, nous montrons que le développement de l'inflammation expérimentale de l'intestin, s'accompagne de modifications des populations jéjunales d'adrénocepteurs consistant en une progressive "up-régulation" des adrénocepteurs al et a2 concomitante d'une "down-régulation" des adrénocepteurs 13 au cours du temps. (3). L'utilisation de traitements in vivo à l'aide d'agents pharmacologiques à potentialité anti- inflammatoire a permis de décrire partiellement, les mécanismes et les médiateurs contribuant à la genèse de ces altérations, suggérant le rôle du monoxyde d'azote, des leucotriènes et des médiateurs mastocytaires dans la régulation pathologique inverse des adrénocepteurs intestinaux. (4). Par le biais d'études pharmacologiques de contractilité musculaire dans un système de superfusion in vitro, nous avons tenté de corréler les altérations des populations des adrénocepteurs membranaires à des modifications fonctionnelles. Réalisées au niveau du muscle lisse iléal, ces études montrent une disparition de la réponse contractile musculaire à la stimulation al et a2 adrénergique au cours de l'inflammation. Une altération de la réponse contractile à d'autres neurotransmetteurs ou médiateurs classiques intestinaux est également observée. Le profil contractile basal des deux couches est modifié mais les mécanismes contractiles non médiés par des récepteurs sont conservés. (5). Par des pré-traitements in vitro à l'aide de médiateurs pro-inflammatoires, nous montrons l'efficacité de l'interleukine-1B à moduler la réponse musculaire a-adrénergique. Enfin, par l'utilisation d'un modèle in vivo de dénervation, nous montrons que les modifications fonctionnelles des adrénocepteurs intestinaux observées au cours de l'inflammation pourraient en partie refléter des altérations affectant leur innervation. Les modifications du nombre et de la fonction des adrénocepteurs intestinaux pourraient en partie participer aux altérations de la motricité digestive associées à l'inflammation. Des régulations homologues en réponse à une dénervation fonctionnelle et des régulations hétérologues par des médiateurs de l'inflammation libérés en grandes quantités lors du processus inflammatoire pourraient être à l'origine de ces modifications.
ANALYSE DES FORMES MOLECULAIRES DE SOMATOSTATINE SECRETEES PAR UNE LIGNEE DE CELLULES TUMORALES ENDOCRINES DE PANCREAS DE RAT (RIN T3) : IMMUNO- DETECTION ET PURIFICATION D'UN PRECURSEUR
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1990-04-02) LHERISSON, Christine
Résumé : Les peptides "somatostatine" jouent un rôle fondamental dans la régulation des fonctions neuro- endocrines, centrales et périphériques, ainsi que dans le contrôle de nombreux phénomènes sécrétoires et moteurs, en particulier au niveau digestif. A ce large spectre d'action, des travaux plus récents ajoutent un effet anti-prolifératif à la fois "in vivo" et "in vitro". Malgré cet effet ,la biosynthèse et la sécrétion du peptide a été décrite pour des lignées cellulaires établies. Ce travail montre que les cellules tumorales endocrines RINT3 biosynthétisent et exportent de fortes quantités de somatostatine dosée par radioimmunologie. La somatostatine accumulée dans le milieu de culture n'inhibe pas la croissance de ces cellules. Devant cette apparente contradiction, nous avons décidé d'analyser plus précisément les formes moléculaires de somatostatine, produites par la lignée RINT3 issue d'un cancer radio-induit chez le rat. En effet, s'il est maintenant bien établi que les formes courtes somatostatine-15-28 (S15-26) et somatostatine-28 (S28) corrrespondent aux produits de maturation de précurseurs biosynthétiques, le rôle respectif de ces différentes formes n'est pas clairement défini. La première partie de notre travail a été consacrée à la mise au point d'un immuno-transfert adapté à la détection des différentes formes moléculaires de somatostatine dans le milieu de culture.Par cette méthode, nous avons confirmé des résultats obtenus par analyses chromatographiques suivies de dosages radioimmunologiques, en faveur de l'exportation, dans le milieu de culture, de composés de haut poids moléculaire. Un précurseur de somatostatine de 15 kD est sécrété de façon prédominante. L'étude par immuno-transfert montre que ce dernier est identique à la prosomatostatine hypothalamique extraite du cortex de rat. Cette proforme est spécifiquement détectée par deux groupes d'anticorps dirigés contre des épitopes différentes de la S28. Une faible partie de ce précurseur est retrouvée sous une forme de plus haut poids moléculaire 29 kD convertible en 15 kD par réduction. Cette prédominance de précurseur dans le milieu extracellulaire suggère un défaut dans les processus de maturation post-traductionnels, conduisant à la production de formes non maturées. Ce défaut de maturation pouvant être lié à une modification de la structure primaire du précurseur, nous avons abordé par la suite une purification du peptide de 15 kD en vue de son séquençage.Les paramètres mis en jeu pour purifier la prosomatostatine sont la taille, la charge et l'hydrophobicité. Les modes de séparation par échange d'ions et polarité de phase inverse, utilisés en chromatogaphie liquide haute performance, ont été combinés. Ils ont permis de séparer plusieurs espèces immunoréactives, la proforme de 15 kD étant localisée dans les éluats par immuno-transfert. Si ces deux étapes enchainées procurent un coefficient de purification important, l'apport de la chromatographie de tamis moléculaire en étape préliminaire est très favorable pour l'élimination de protéines contaminantes de plus haut poids moléculaire. Cependant, les trois techniques chromatograhiques ne peuvent être enchainées qu'après enrichissement sélectif du matériel en immunoréactivité. Pour cela, des études de sécrétion en milieu minimum ont été réalisées. L'augmentation du calcium extracellulaire stimule de façon dose-dépendante la sécrétion de la somatostatine. De même, l'action d'un ester de phorbol tel que le TPA accélère cette sécrétion tandis que la CCK et la Forskoline n'ont qu'un faible effet. Ces résultats montrent que la libération de somatostatine dans le milieu de culture est stimulable. Ce travail démontre qu'il existe bien un défaut de maturation dans la biosynthèse de la somatostatine, associé à l'exportation d'un précurseur dans le milieu. Son poids moléculaire a pu être établi à 15 kD. De plus, un enchainement de techniques permettant de purifier la proforme au sein des composants du milieu de culture a été proposé.Le milieu defini, correspondant à la collecte d'une solution stimulée par le calcium (5 mM ), doit fournir un matériel adapté à la purification du précurseur .
ANTIPORT Na+/H+ DES CELLULES ACINEUSES PANCREATIQUES : REGULATION PAR LES PEPTIDES NEURO-DIGESTIFS ET RÔLE DANS LA PROLIFERATION CELLULAIRE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1990) DELVAUX, MIchel
L'antiport Na+/H+ est un mécanisme de transport membranaire, ubiquitaire, échangeant un ion Na pour un proton. L'activation de cet échange par les peptides CCK et Gastrine conduit à une augmentation du pH intracellulaire. L'effet de la CCK est médié par le récepteur CCK et semble impliquer la stimulation de la kinase C au niveau intracellulaire. L'activation de l'antiport par la gastrine ne passe pas par le récepteur CCK. L''antiport.Na/H est également présent au niveau de la lignée cellulaire AR4-2J, dérivée d'un cancer pancréatique de rat et présente les mêmes__ caractéristiques pharmacologiques : dépendance vis-à-vis des concentrations externes en Na, inhibition par l'amiloride. L'activation de l'échange Na/H et la stimulation de la prolifération cellulaire par le sérum de veau foetal sont corrélées. L'amiloride et ses analogues inhibent échange Na/H et prolifération cellulaire • aux mêmes concentrations, témoignant du rôle de l'antiport dans le contrôle des phénomènes prolifératifs au niveau de cette lignée cellulaire. Néanmoins, d'autres agents stimulants sont capables de stimuler l'échange Na/H sans être des facteurs de croissance, indiquant que d'autres trocessus métaboliques sont contrôlés par l'activation de l'antiport Na/H, notamment des phénomènes d'hypertrophie cellulaire.
BIOSYNTHESE DE LA THROMBOXANE A2 ET DE LA PROSTACYCLINE ET HOMEOSTAS1E CARDIOVASCULAIRE ETUDE PHARMACOLOGIQUE ET PHYSIOPATHOLOGIQUE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1989-01) LASSERRE, Bernard
Les recherches récentes ont montré que l'équilibre Thromboxane A2 Prostacycline (TXA2-PGI2) jouait un rôle important dans l'homéostasie cardiovasculaire. Nos recherches ont permis de mettre en évidence - des structures chimiques originales capables d'agir sur la biosynthèse de la TXA2 et de la PGI2 d'une part, et d'autre part, sur l'activité TXA2 synthétase et PGI2 synthétase du tissu cardiaque. Des grandes lignes d'une relation structure-activité ont pu être mises en lumière li - le mécanisme d'action de produits utilisés en clinique cardiovasculair•e_ et des principes actifs de plantes utilisées en médecine traditionnelle africaine pour le traitement des maladies cardiovasculaires - les réponses du coeur et des vaisseaux à des agressions provoquées par l'anoxie, l'ischémie du myocarde * chez l'animal • chez l'homme au cours des ischémies successives provoquées par l'angioplastie. Les résultats obtenus sont susceptibles de nous permettre' - de prévoir les accidents possibles survenus chez les patients pendant la pratique de l'angioplastie - de diagnostiquer et de pronostiquer des incidents cardiovasculaires chez des sujets porteurs d'une maladie telle que le diabète et chez des sujets apparemment sains - de fournir une base pour des recherches pharmacologiques et thérapeutiques des maladies du coeur et des vaisseaux.
CARACTERISATION DES DETERMINANTS MOLECULAIRES DU RECEPTEUR CCK2 IMPLIQUES DANS LE SITE DE LIAISON DE LA CCK ET l'ACTIVATION DU RECEPTEUR
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 2001-09-14) GALES, Céline
Le récepteur de la cholecystokinine Cc_ <<2 (CCKraiGastrine) est un récepteur à 7 domaines transmembranaires couplé aux protéines G (RCPG). Il joue un :rôle physiologique important dans la sphère a,astrointestinale et le systc.',,rne nerveux central ce qui en fait une cible pharmacologique importante pour le développement de drogues spécifiques en vue d'une utilisation thérapeutique. Or, jusqu'à présent les molécules üécouverteS par screening aléatoire se heurtent à des problèmes de biodisponibilité, de spécificité ou. d'effets secondaires. Dans ce cadre, l'étude structurale du récepteur ouvrirait de nouvelles voies de recherche sur le design rationnel de drogues ihérapelftiques ciblant ce récepteur. Dans l'équipe. nous avons donc entrepris l'étude structure I fonction du récepteur CCK2 (ReCCK2), et plus partieulièrement, cherohé à identifier les résidus du récepteur impliqués dans le site de liaison de !a CCK et l'activation du récepteur, en utilisant des techniques de mutagenèse dirigée couplée à des études de pharrnacochimie et de madélisation moléculaire. Des travaux antérieurs avaient permis d'identifier 6 rés-icius R-CCK2 impliqués dans la liaison de !a CCK. J'ai donc recherché avec quelle fonction de la C(7.1<-interagiSsait l'un de ce.-; résidus, rhistidine .207 dont la mutation diminuait plus de 300 fois la liaison de la CCK. Ainsi, en utilisant des oeptides modifiés sur chaque résidu de la CCK, no;lS avons montré oue l'histidine 207 du récepteur intereigit directement et spécifiqueiTtéht s).vec l'acide aSpartigtie C-terminal ia OOK. L'identification de cette interaetion nous a ensuite i.-)errnis de positionner la CCK dans un modé:le tridin-lensionnel R-CCK2. Ce modèle a révélé trois domaines tre.nsrnembranaires (TM) ti ès importants pour !a liaison de la CCK: les TM 3, 6 et 7. Nous avons ai.ors essayé de confirmer expérimentaiement certaines de ces interactionS. Notamment, en adoptant une stratégie identique à celle utilisée Pour l'histidine, 207, nous avons pu démontrer l'interaction du résidu asparagine 358 (TiVIG) du R- CCK2 avec C-terminale de la CCK, une fonction essentielle pour l'activité biologique de la CCK. Ers ear.2.-Iiiéle, nous avon:.-; recherche ies resicsis, l'--CCK2 impliqués spécifiquement dans son - activation. Pour cela, nous àvons. entrepris !a rasslion de tous les résidus conservés dans la famille des RC'PG et .se.dement présents dans le K.CCK2 car ces résidus sont connus pour etre essentiels à leur activation. Aussi: par cette strategie, i'ai pu montrer que le résidu Asparagine. '39 au niveau du TM.7, est esSentiel pour l'activation R-CCK2. effet, la mutation de ce résidu (Asn391'; SitU>ï c-Ja.ns le motif ti ès conservé dans !es RCPG, NPXXY, induit Jale inactivaticn totale de ce récepteur sur différentes voieS de signalisation (PLC et MARK) sans affecter Sa .haute affinité pour la CCK. Par une stratégie d'immunoprécipitation du récepteur, suivie d'un western blot à l'aide d'anticorps anti-Gag, nous avons montré que la SCUS-unité Go.q était coirnmunoprécipitée avec le récepteur muté après stimulation des cellules par la CCK. Ccc,i suggère que ia haute affinité du récepteur muté pour la CCK rést.ilte t_le son couplage, à la protéine Gq et que te résidu Asn391 spécifiquement impilqué dans l'aetivation de la protéine- Gq. De façon plus générale, il semble dons qu'il y ait dee résidus des récepteurs à- 7 domaines transmernbranaires qui soient spécifiquement impiiqueS dans l'association du récepteur avec la protéine G alors que d'autres résidus interviendraient plus particulièrement dans l'activatic, de la protéine G. A l'opposé, au niveau du Tiv13, nees avons identifié. l'acide glutamique El 51, situé dans le motif très conserve. ERY. dont la mutation rend le r..scepteur constitutivement actif. L.:ftude plus approfondie de ce résidu a permis da. mettre en évidence 'que ce récepteur muté n'active que certaines voieS de signalisation associées au R-CCK2. Par ailleurs, nous avons pu montré que ce récepteur constitutif était très stable et très bien exprimé, ce qui es' une caractéristique atypique comparée à celles des autres rdcepteurS constitutifs. Nous avons également observé des changements . riiorphologiqu2s importants (de type Ras transformé) dans différentes lignées cellulaires exprimant de façon stable ce récepteur constitutif; ces différences semblent associées à l'activation spécifique de certaines pro{Éit;eS du eytosquelette. plu,.e nous avons démontré que ce récepteur induit une prolifération spontanée et accrue des cellules NII-.13T3 et est turnorigène eprès injection de ces cellules dans des souris 'riLide, ce qui suggère le potentiel oncogéne-du récepteur CC:K.2. Tous ces resultats à la foie tous ces résidus impilqués dans ,e site de liaison de la CCK et ceux impliqués dans l'activation récepteur permettront de mieux comprendre ies bases moléculaires du récepteur CCK2 qui régissent le passage de son état inactif vers l'état actif. Ceci devrait nous permettre de conceptualiser des molécules à activités agonistes ou antagonistes ciblant le récepteur CCK2 en vue d'une utilisation en thérapeutique.
CARACTERISATION PHARMACOLOGIQUE DE L'ALPHA2A-RECEPTEUR AI3RENERGIQUE D'ORIGINE HUMAINE. EVALUATION DE SON ROLE DANS LE CONTROLE DE LA LIPOMOBILISATION CHEZ-L'HOMME.
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1989-01-06) GALITZKY, Jean
1- Nous avons contribué à la caractérisation pharmacologique des récepteurs alpha2-adrénergiques postsynaptiques humains (type alpha2A) en utilisant deux modèles cellulaires: l'adipocyte et la cellule adénocarcinomateuse colique humaine (lignée cellulaire HT 29). Les alpha2-agonistes définis sur les alpha2-récepteurs du système nerveux central sont moins efficients sur le récepteur alpha2-postsynaptique; la clonidine, en particulier, n'exerce que des effets agonistes partiels. Par contre, un nouvel agent hautement sélectif, l'UK-14,304, s'est avéré posséder des propriétés d'agoniste total en tous points équivalentes à celles de l'hormone: l'adrénaline. Les récepteurs alpha2- adrénergiques des deux modèles cellulaires sont similaires sur le plan pharmacologique. Une étude comparative du phénomène d'agonisme partiel ou total a été entreprise sur ces deux types cellulaires. Elle révèle l'existence de comportements distincts entre l'agoniste total et l'agoniste partiel qui sont semblables sur les deux systèmes cellulaires étudiés. 2- Nous avons entrepris une étude visant à définir le rôle des alpha2-récepteurs adipocytaires dans le contrôle de la lipomobilisation chez l'homme. L'étude de la distribution de ces récepteurs alpha2-adrénergiques dans différents dépôts adipeux montre que les récepteurs alpha2-adrénergiques inhibiteurs de la lipolyse sont 2 à 4 fois plus abondants que les bêta-récepteurs stimulants dans les adipocytes des dépôts sous- cutanés fémoraux ou abdominaux. Par contre, dans le tissu profond (omental) bêta- et alpha2-récepteurs sont en proportion équivalente. La mesure de la réponse biologique induite par l'hormone circulante (l'adrénaline) indique que ce sont les tissus les plus richement équipés, en alpha2-récepteurs, qui sont le moins mobilisables . L'étude des effets métaboliques provoqués par l'administration orale d'un alpha2 bloquant chez l'homme (la yohimbine) montre que cet agent est lipomobilisateur avec peu d'effet insulino-sécréteur. Les alpha2-antagonistes pourraient donc être proposés comme adjuvant dans le traitement de l'obésité.
CARACTERISATION, PAR ANALYSE MORPHONUCLEAIRE, DE CANCERS PULMONAIRES HUMAINS GREFFES CHEZ LA SOURIS "NUDE"
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1991-02-19) KRUCZYNSKI, Anna
Les cancers pulmonaires "Autres qu'à Petites Cellules" constituent l'une des premières causes de mortalité due à la pathologie tumorale. Ils sont peu sensibles à la radiothérapie et insensibles à la chimiothérapie. De plus ils montrent une diversité de comportement vis-à-vis des traitements thérapeutiques. Dans le but d'aborder ce problème, un modèle permettant d'étudier ces cancers a été proposé et de nouveaux facteurs pronostics ont été recherchés. Ce modèle est constitué de tumeurs pulmonaires humaines greffées chez la souris "nude". Il a été caractérisé au niveau cellulaire par cytogénétique, par examens anatomo-pathologiques et par une analyse multiparamétrique informatisée de l'image nucléaire. Cette dernière technique est fondée sur la caractérisation morphonucléaire de noyaux cellulaires fixés et colorés par la méthode de Feulgen. Quinze paramètres morphonucléaires de type morphométrique, densitométrique et textural ont été pris en compte. L'intérêt de cette analyse multiparamétrique a été illustré sur le système biologique le plus simple constitué par des lignées cellulaires cultivées in vitro. L'analyse multiparamétrique morphonucléaire a permis de distinguer les phases GO-G1, S, G2 et M du cycle cellulaire de la lignée mammaire murine MXT, ce qui est impossible par une analyse monoparamétrique du contenu en ADN nucléaire. L'influence de divers agents anti-cancéreux (poison des microtubules : Navelbine, agent intercalant : Adriamycine et un composé alkylant), sur la répartition des cellules dans les différentes phases du cycle cellulaire de la lignée MXT, a été évaluée en fonction de ces critères morphonucléaires. Neuf tumeurs pulmonaires humaines "Autres qu'à Petites Cellules" xénogreffées ont ensuite été établies et constituent le modèle expérimental choisi. Les histogrammes de répartition de la quantité d'ADN et des surfaces nucléaires ont révélé une hétérogénéité cellulaire de la majorité des tumeurs xénogreffées. L'étude histologique a confirmé l'hétérogénéité des surfaces nucléaires, lorsque les différences de tailles étaient importantes. Elle a, de plus, mis en évidence l'hétérogénéité histologique de la seule tumeur xénogreffée homogène quant à son contenu en ADN nucléaire. L'analyse cytogénétique a montré que les xénogreffes humaines avaient conservé leurs caractéristiques humaines au cours de l'étude. La comparaison des histogrammes d'ADN, obtenus pour différents passages, indique que les proportions relatives des sous-populations, constituant la majorité des tumeurs xénogreffées, évoluent au cours des transplantations successives. L'analyse multiparamétrique tenant simultanément compte des quinze paramètres morphonucléaires corrobore ces observations. Afin de tenter de caractériser chaque xénogreffe et d'évaluer leur stabilité, les paramètres qui présentaient les variations les plus significatives ont été combinés dans une équation définissant un facteur nommé MLI (Malignancy Level Index). Ce facteur a permis de classer les neuf cancers xénogreffés en fonction de leur degré de différenciation. Cette approche cytophotométrique a enfin été appliquée en pharmacologie afin d'essayer de corréler les effets microscopiques et macroscopiques d'agents anti-tumoraux. Une variabilité de la sensibilité d'une des xénogreffes nommée KLX-7 à la Navelbine a été mise en évidence, au cours des transplantations successives, de manière conventionnelle par mesures des variations des surfaces tumorales. L'analyse biochimique des cibles potentielles de cette substance anti-tumorale, par exemple les isotubulines, n'a pas fourni d'éléments de réponse à ce problème. Par contre, le composé F 35, dérivé des cyclophosphazènes, a montré une efficacité thérapeutique stable au cours des passages en série. Afin de pouvoir suivre, au cours du temps, l'effet de substances anti-cancéreuses ou hormonales, par analyse d'image, en n'utilisant qu'un nombre réduit d'animaux, la technique de la ponction à l'aiguille fine a été employée. Celle-ci permet de recueillir du matériel tumoral de manière atraumatique sans sacrifier l'animal. Son utilisation a été validée en cytophotométrie par rapport à celle de l'empreinte tumorale. Les efficacités thérapeutiques de la Navelbine et de l'agent F 35 ont ainsi été évaluées au cours du traitement de la tumeur xénogreffée KLX-7. Si la Navelbine induit une augmentation significative du nombre de mitoses, ce qui peut être observé à l'aide d'un simple microscope, l'analyse d'image a été nécessaire pour mettre en évidence l'effet de l'agent F 35. Celui-ci provoque une disparition temporaire de certaines des sous-populations constituant la tumeur hétérogène KLX-7. Lorsque cet effet est maximum, la valeur correspondante du facteur MLI (Malignancy Level Index) est minimum. Les observations microscopiques et macroscopiques ont été corrélées pour les deux agents anti-tumoraux étudiés. Enfin, l'analyse d'image a été appliquée au suivi de l'influence de diverses hormones sur la tumeur kénogreffée KLX-7. Ceci a' montré que l'oestradiol, la gastrine et le FGF (Fibroblast Growth Factor) ont un effet significatif sur la prolifération de cette tumeur pulmonaire xénogreffée. Ainsi la caractérisation des tumeurs xénogreffées par diverses approches (cytogénétique, histologie et analyse d'image) est indispensable pour mieux connaîtra et Maîtriser ce modèle. De plus, l'investigation microscopique de ces xénogreffes par analyse informatisée de l'image nucléaire a permis une quantification au niveau cellulaire de leur évolution biologique. Une importante série d'expérimentations est programmée afin de valider cette approche empirique et tenter de définir si les caractéristiques d'un cancer donné peuvent être corrélées à l'efficacité d'une chimiothérapie.
CHRONOPHARMACOCINETIQUE DE LA CYCLOSPORINE A Etude expérimentale chez le rat Wistar
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1994-06-20) HOUTI, Imad Eddine
RESUME La cyclosporine A (CsA) est un puissant immunodépresseur largement utilisé pour prévenir le rejet des organes transplantés. Du fait d'un index thérapeutique étroit et d'une très importante variabilité tant inter- qu'intraindividuelle de sa biodisponibilité, ce médicament reste d'un maniement délicat. Il s'agit en effet de garantir son efficacité en évitant tout rejet par sous-dosage et de parer à toute toxicité résultant d'un surdosage. Notre étude a eu pour objectif d'analyser l'influence du stade temporel d'administration de la CsA sur son devenir, chez le rat Wistar. Cette étude chronopharmacocinétique comporte deux volets complémentaires, selon la voie d'administration de la CsA : intra-veineuse i.v. (5 mg/kg) ou orale p.o. (20 mg/kg). Dans chaque cas, 4 groupes de rats sont constitués, différant par l'horaire de traitement (exprimé en Heure Après le Début de la Lumière) : 02, 08, 14 ou 20 HADL. La méthode de dosage par HPLC de la CsA dans le sang, le plasma, le foie et le rein a fait l'objet de validations statistiques. Voie iv : les profils pharmacocinétiques de concentration plasmatique ont été analysés selon 2 approches, dépendant ou non d'une modélisation. Un modèle tri-exponentiel a permis d'ajuster aux mieux les variations des concentrations en fonction du temps. Une analyse de variance à 2 facteurs a conclu à l'influence très significative (S0.0001) de l'horaire d'administration, qui se manifeste essentiellement au niveau de 11 distribution de la CsA puisque le temps de demi-vie d'élimination (22.5 ± 2.2 h) est indépendant de l'heure de traitement, contrairement à raire sous la courbe de concentration en fonction du temps ASC (35275 ± 1185 µg.1-'.h à 08 HADL vs 29087 ± 752 µg.1-1.h à 20 HADL) et à la clairance CL (0.142 ± 0.005 1/11/kg à 08 HADL vs 0.172 ± 0.0041/h/kg à 20 HADL). Voie orale : l'influence de l'horaire d'administration est dans ce cas encore plus marquée, car elle affecte essentiellement la phase d'absorption. Les ASC et la biodisponibilité F - déterminée à partir des concentrations plasmatiques iv et po - varient d'un facteur 4 à 5 selon l'horaire de traitement. C'est après administration à 08 ou 20 HADL que la biodisponibilité est la plus élevée (0.19 ± 0.03 en moyenne) elle est bien plus basse après administration à 02 ou 14 HADL (0.05 ± 0.009 en moyenne). Ces variations ultradiennes (T = 12 h) pourraient être attribuées en partie à des modifications de la capacité de métabolisation des enzymes. Les profils pharmacocinétiques obtenus pour le sang et les organes évoluent parallèlement à ceux du plasma. Le temps de demi-vie d'élimination ne diffère pas de celui déterminé à partir de la voie iv et ne dépend pas de l'horaire de traitement, à l'exception du rein pour lequel une variation circadienne est démontrée. Les plus fortes concentrations sont obtenues dans le foie, puis le rein, le sang et les plus faibles dans le plasma. Le rapport de concentration sang/plasma dépend significativement de l'horaire de traitement, c'est à 08 HADL qu'il est le plus bas. Ce fait est révélateur de variations circadiennes de la liaison de la CsA aux érythrocytes. Des pics secondaires décalés de 3 à 4 heures ont été observés dans tous les cas, très marqués après administration orale, plus ténus mais statistiquement significatifs après administration iv. Ils pourraient être attribués à une remise en circulation (voie iv) ou une solubilisation de novo (voie orale) par la bile. Les variations temporelles de la toxicité rénale induite par la CsA peuvent résulter en partie de ces modifications chronopharmacocinétiques.
CHRONOPHARMACOCINETIQUE EXPERIMENTALE ET CLINIQUE DE LA DOXORUBICINE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1988-03-01) SQALLI, ALI
Les agents anticancéreux manifestent leurs propriétés cytotoxiques dans tous les tissus, qu'ils soient cancéreux ou non. Il en résulte que les doses et les schémas d'administration utilisés, dans l'espoir d'augmenter l'index thérapeutique de ces médicaments, réalisent un compromis entre une toxicité excessive pour l'hôte et une efficacité antitumorale insuffisante. Il est bien connu maintenant que l'horaire d'admini- stration d'un médicament influence, dans bien des cas, et sa toxicité et son efficacité. Le but des études chronopharmaco- logiques est de préciser d'une part, la relation entre l'horaire d'administration et l'action sur les systèmes cibles (chronesthésie), et d'autre part, l'influence de l'horaire d'administration sur le devenir du médicament dans l'organisme (chronopharmacocinétique). L'approche chronopharmacocinétique tend à démontrer que les variations, chronopharmacologiques peuvent s'expliquer par des variations temporelles dans les différentes étapes du devenir du médicament in vivo. Ainsi la mise en évidence de modification circadienne des cinétiques plasmatiques, d'une part, des paramètres pharmacologiques relatifs au mécanisme d'action d'autre part, permetteront d'envisager une optimisation temporelle du traitement.Des travaux français et étrangers, analysés dans la première partie de ce travail, ont prouvé que l'efficacité comme la tolérance de la DOXORUBICINE (DXR), agent antinéoplasique évoluaient dans le nycthémère, en fonction de l'horaire d'administration. L'objectif de ce travail est donc: - Etudier la chronopharmacocinétique d'un antinéo-I plasique, la Doxorubicine (DXR), chez l'animal et d'explorer la --.__ voie d'administrationcintrapéritonéale. - Préparer l'établissement de schémas chrono- thérapeutiques par l'étude des variations du devenir du médicament chez l'homme en fonction de l'horaire d'administration en cas d'un bolus I.V ou en fonction du moment du nycthémère en cas de perfusion continue visant à mieux comprendre les changements périodiques des effets de ce médicament.
CONTRIBUTION A L' ETUDE DE LA PHARMACOCINETIQUE D'UN ANTIAGREGANT PLAQUETTAIRE CHEZ LE RAT ET LA SOURIS
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1982-02-05) RODR IGUEZ, ANNIE
Le travail que nous venons de présenter permet de tirer un certain nombre de conclusions en ce qui concerne le métabolisme et la toxicité des deux produits de structure thienopyridinique : le 5332C etle 2362. Au plan métabolique, les différentes études ont montré que, quel que soit l'analogue considéré, le métabolisme est très voisin si l'on envisage par exemple les données morphologiques obtenues par autoradio- graphie macroscopique. S'il n'a pas été possible de préciser de manière complète, la structure de tous les métabolites éliminés dans l'urine par exemple, on peut logiquement penser que les deux analogues struc- turaux suivent des voies métaboliques analogues dans la mesure où par autoradiographie, on retrouve des fixations persistantes sur des struc- tures anatomiques qui sont très spécifiques au plan métabolique : la glande thyroïde, les bronchioles pulmonaires entre autres. Cela est aussi confirmé par les données cinétiques comparables obtenues pour ces deux produits. Au plan toxicologique, notre travail autoradiographique a permis de constater la persistance du produit ou de certains de ses métabolites dans le rein principalement à la jonction cortico-médullaire. Une telle fixation pourrait rendre compte d'une éventuelle néphrotoxicité. Les investigations que nous avons menées ont montré dans des conditions expérimentales bien précises que la prise de ce produit ne modifie pas la fonction rénale. Notre travail constitue ainsi, un nouvel exemple de l'interét et de la nécessité d'études pluridisciplinaires concertées dans les investigations métaboliques et toxicologiques des xénobiotiques
CONTRIBUTION A L'ANALYSE GRANULOMETRIQUE DES POUDRES PAR EXAMEN MICROSCOPIQUE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1983-03-28) VIARD, Marie - Pierre
CONTRIBUTION A L'ETUDE DU MÉCANISME D'ACTION DE L'ACETATE D'ELLIPTINIUM
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1985-11-28) DUGUE, Bernard
Différents aspects du mécanisme d'action de l'acétate d'elliptinium (9-OH-NME, Celiptium®) ont été envisagés successivement. 1) Synthèse, structure, étude de dérivés de la 9-OH-NME fonctionnalisés en position 9. Mise en évidence de la glucuroconjugaison de la 9-OH-NME chez le rat et chez l'homme. 2) Fixation covalente de la 9-OH-NME sur des acides nucléiques in vitro. Mise au point d'une technique EIPLC pour déterminer cette fixation et quantification avec un isotope radioactif de 9-OH-NME. 3) Fixation covalente de la 9-OH-NME sur les acides nucléiques in vivo. Mise au point d'une méthode pour quantifier la fixation covalente sur—irADN et l'ARN extraits de cellules L1210 en culture. Sensibilité inférieure à 1 molécule de drogue fixée/10 bases en utilisant de la 9-OH-NME fortement marquée. Etude cinétique, dose-réponse, réparation. Comparaison avec la fixation obtenue pour la NME (dérivé non hydroxylé). 4) Mise en évidence d'un nouveau type d'interaction possible avec la 9-OH-NME : l'interaction 9-OH-NME/complexe ferrique conduit à la dégradation de la déoxyguanosine en guanine et 8-OH-dG. Etude du mécanisme de cette réaction et mise en évidence des radicaux HO` formés en RPE.
CONTROLE ADRENERGIQUE DE LA LIPOLYSE DANS LE TISSU ADIPEUX : DESENSIBILISATION A COURT-TERME DES VOIES f3-ADRENERGIQUES, RECEPTIVITE a2- ET f3 -ADRENERGIQUES CHEZ LES PRIMATES
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1995-07-10) BOUSQUET-MELOU, Alain
L'activation du système nerveux sympathique constitue le principal facteur de mobilisation des lipides stockés dans le tissu adipeux. Les catécholamines stimulent des récepteurs adipocytaires [3-adrénergiques ([3-AD) - f31, j32, fia - lipolytiques et a2-AD anti-lipolytiques. La coexistence de trois sous-types de récepteur 5-AD couplés au même effet biologique (la lipolyse) peut apparaître redondante. Une explication à la présence de ces trois sous-types peut être envisagée dans l'existence de régulations différentes de ces récepteurs. Dans ce contexte, nous avons étudié les mécanismes de désensibilisation à court-terme des voies 5-AD d'adipocytes de rat incubés pendant 1 heure en présence de 10 µM d'isoprénaline (f3-agoniste non sélectif). L'isoprénaline induit une désensibilisation des réponses lipolytiques j3-AD (noradrénaline, f31-, 52- et 53-agonistes) et non 5-AD (ACTH). Nous avons localisé plusieurs processus de désensibilisation, en amont et en aval de la production d'AMPc. En amont se situent les processus classiques ciblés sur les récepteurs (découplage et internalisation), qui inhibent la voie de production du second messager. La voie [32-AD est plus sensible à ces mécanismes que les voies 51 et f33. En aval, grâce à l'utilisation d'un inhibiteur sélectif de la phosphodiestérase adipocytaire (l'OPC 3911) nous avons identifié une voie de régulation originale : la stimulation de la dégradation de l'AMPc par l'activation de la phosphodiestérase. Ce phénomène rend compte à lui seul de la désensibilisation de la réponse lipolytique à la noradrénaline. L'activation de la phosphodiestérase étant un mécanisme AMPc-dépendant, notre observation ajoute une boucle supplémentaire d'autorégulation des taux d'AMPc aux processus de désensibilisation à court-terme du système récepteurs f3-AD/adénylyl cyclase. Parmi les quatre types de récepteurs adrénergiques impliqués dans le contrôle de la lipolyse adipocytaire, les sous-types a2- et 53-AD sont des cibles potentielles de traitements pharmacologiques de l'obésité et sont exprimés de façon variable selon les espèces. Les études comparées montrent qu'aucun modèle animal ne possède un tissu adipeux dont les deux composantes a2- et 53-AD soient similaires à celles du tissu adipeux humain. Nous avons étudié le contrôle adrénergique de la lipolyse adipocytaire chez trois espèces de singes : le marmouset, le macaque et le babouin. L'étude de la réceptivité 5-AD nous a permis de montrer la présence de récepteurs 51- et 52-AD, et des variations dans l'expression de la voie f33-AD. Les agonistes f33-AD sont lipolytiques au niveau des adipocytes de marmouset, alors que chez le babouin et le macaque, tout comme chez l'homme, la voie 53-AD semble peu (ou pas) fonctionnelle. Les adipocytes des trois espèces présentent une voie a2-AD anti-lipolytique puissante, fortement impliquée dans le contrôle de la lipolyse par l'adrénaline et la noradrénaline. Les profils de réponse à d'autres systèmes lipolytiques (adrénocorticotropine, hormone parathyroïdienne, histamine) ou anti- lipolytiques (adénosine, peptide YY) sont similaires chez le babouin, le macaque et l'homme. Le babouin et le macaque sont les seules espèces de laboratoire connues dont les cellules adipeuses présentent à la fois une voie 53-AD peu ou pas fonctionnelle et une voie a2-AD puissante. De ce point de vue, ils constituent actuellement les seuls modèles animaux comparables à l'homme.
CONTROLE CENTRAL ET REGULATION DE LA PRESSION SANGUINE ARTERIELLE PAR LES SYSTEMES CHOLINERGIQUES CENTRAUX. APPROCHE PHARMACOLOGIQUE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1999-11-03) LAZARTIGUES, Eric
L' acétylcholine, impliquée dans les processus de mémorisation et mise en cause dans la maladie d'Alzheimer, intervient également dans la régulation centrale de la pression sanguine artérielle (PSA). Au cours de ce travail, nous avons précisé les mécanismes physiopathologiques responsables de son implication dans les mécanismes d'élévation de la PSA et de l'hypertension artérielle, chez le chien, le rat et l'homme. Chez l'animal normotendu, l'administration centrale ou périphérique d'agents cholinomimétiques (acétylcholine et inhibiteurs de l'acétylcholinesterase) engendre une augmentation de la PSA, associée à une bradycardie. Les récepteurs cholinergiques impliqués dans l'élévation de PSA sont de type muscarinique puisque cet effet presseur est antagonisé par l'atropine. D'autre part, l'absence de modification après administration intraveineuse de méthylatropine (antagoniste des récepteurs muscariniques périphériques) confirme l'origine centrale de cette réponse pressive. Cette mise en jeu dés récepteurs muscariniques centraux se traduit à la périphérie par une augmentation du tonus orthosympathique, révélée par le dosage des catécholamines plasmatiques et l'utilisation d'antagonistes des récepteurs vasculaires al adrénergiques. Le dosage des taux plasmatiques de vasopressine et l'utilisation d'antagonistes des récepteurs vasculaires VIA témoignent également de la libération de vasopressine. Le sous-type de récepteurs muscariniques centraux, impliqué dans la réponse cholinergique pressive est majoritairement de type M2 chez le rat et M1 chez le chien. Chez le chien, les récepteurs cholinergiques centraux ne semblent pas impliqués dans l'arc baroréflèxe mais exercent un effet modulateur sur ce dernier. Chez l'animal hypertendu, la réponse pressive est majorée chez le rat spontanément hypertendu (SH) et minorée chez le chien hypertendu-obèse. D'autre part, chez le rat SH des modifications des récepteurs centraux de type MI, en terme d'expression ou d'affinité, semblent être à l'origine de l'hypersensibilité de cette souche aux agents cholinomimétiques. Chez l'homme, les posologies de tacrine utilisées (40 mg per os) n'ont pas permis de retrouver ces résultats.
CONTROLE DE LA PROLIFERATION CELLULAIRE D'ADENOCARCINOMES OVARIENS, IN VITRO, PAR L'ACIDE TOUT TRANS RETINOIQUE : INTERET POTENTIEL DE SON ASSOCIATION AVEC LE CISPLATINE, EN THERAPEUTIQUE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1996-07-04) CALIARO, Marie-Josée
L'adénocarcinome ovarien reste un cancer de mauvais pronostic en raison de l'apparition très rapide de polychimiorésistance. De nouvelles stratégies thérapeutiques ont donc été envisagées, incluant notamment la thérapie de différenciation. Basée sur la réversion possible du phénotype cancéreux, elle implique des agents modulant les fonctions biologiques cellulaires, comme l'acide tout trans rétinoïque (ATRA). Dérivé physiologique de la vitamine A, il intervient dans le contrôle de la prolifération, de la différenciation et de 1'apoptose des cellules normales et tumorales. Afin de montrer l'intérêt potentiel de ce rétinoïde dans cette pathologie, nous avons effets sur quatre lignées d'adénocarcinome ovarien humain, OVCCRi, NIHOVCAR3, SKOV3 étudié ses et IGROVi et mis en évidence un effet antiprolifératif et antitumorigène seulement pour les trois premières lignées. Par ailleurs, une corrélation entre le degré de différenciation cellulaire et la réponse à l'inhibition de prolifération engendrée par ce dérivé a pu être montrée. L'absence de marqueurs de différenciation spécifiques de l'épithélium ovarien ne nous a pas permis de conclure à un effet de l'ATRA sur la différenciation des cellules sensibles. Afm d'expliquer l'hétérogénéité de réponse concernant l'inhibition de croissance induite par l'ATRA, nous avons exploré certains éléments de la voie de transmission du signal de ce rétinoïde. Aucune corrélation entre la sensibilité des cellules à l'effet antiprolifératif de l'ATRA et la présence des protéines de liaisons cytoplasmiques (CRABPs) n'a été observée. En revanche, une faible expression des RARy et RXRa a été retrouvée dans les cellules IGROVI., résistantes à l'ATRA, en faveur d'une implication de l'un ou de l'autre ou de ces deux récepteurs dans l'inhibition de croissance engendrée par ce dérivé. Enfin, nous avons montré que l'ATRA induisait l'ARNm du TGFI11, seulement dans la lignée OVCCRi, pour laquelle l'effet antiprolifératif de l'ATRA est associé à des modifications morphologiques et biologiques, suggérant une implication éventuelle de la voie TOPO dans l'inhibition de prolifération ou dans l'un des effets l'accompagnant.L'ATRA inhibant la croissance cellulaire de façon réversible, nous avons combiné ce dérivé avec le Cisplatine (CDDP), cytotoxique le plus employé dans le traitement de la pathologie néoplasique ovarienne et étudié l'effet de cette association sur la prolifération. Une synergie a été observée entre ces deux médicaments uniquement pour les lignées sensibles à l'ATRA. .Les mécanismes responsables de cette synergie ont alors été recherchés. Nous avons pu montrer que la potentialisation de la cytotoxicité du cisplatine par l'ATRA était associée à une diminution de l'activité GST ainsi qu'à un taux d'adduits totaux ADN-CDDP plus élevé. L'induction de l'expression du récepteur à l'EGF par ce rétinoïde pourrait également intervenir dans cette synergie. L'ensemble de ces résultats suggère que l'interaction synergique entre l'ATRA et le CDDP implique un mécanisme multifactoriel et permet de penser qu'un meilleur effet thérapeutique pourrait être obtenu en associant ce rétinoïde à la chimiothérapie conventionnelle, dans le cancer de l'ovaire.
Etude d'un modèle feu cubique Détermination de paramètres physiques lors de la thermolyse de matériaux
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1986-06-17) Palau, Catherine
L'étude de la thermolyse des matériaux doit permettre de trouver des relations simples entre le temps, l'élévation de température et la perte de masse. Il ne s'agit pas de faire une comparaison entre différents matériaux, ni d'analyser un type particulier de produit mais simplement de trouver des points de comparaison permettant d'établir une reproductibilité dans un phénomène, et ainsi de développer des moyens d'analyse et de traitement d'informations adaptés au modèle feu. Le débit massique pour un gramme de matériau passe toujours par un extremum qui signe une transition de phase. Ce maximum facile à déterminer permet de comparer pour un cycle de montée en température constant, la résistance des matériaux à la chaleur suivant leur masse.
ETUDE DE LA LIAISON DES MEDICAMENTS AUX PROTEINES CIRCULANTES PAR LA METHODE DU POINT D'ANNULATION EN SPECTROPHOTOMETRIE DERIVEE ET MICRODIALYSE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 1994-07-29) DE SOUZA MAIA, Maria-Bernadete
ETUDE DES EFFETS DES EXCIPIENTS PHARMACEUTIQUES SUR L'ABSORPTION DES MEDICAMENTS PAR INTERACTION AVEC LA P-GLYCOPROTEINE
(Université Mouloud MAMMERI FACULTE DE MEDECINE TIZI-OUZOU, 2001-09-24) CORNAIRE, Gilles
La P-glycoprotéine (P-gp) est une glycoprotéine membranaire impliquée dans certains phénomènes d'excrétion active ATP- dépendant. Sa surexpression dans les cellules cancéreuses est à l'origine du phénotype de multidrug'resistance et entraîne une diminution des concentrations intracellulaires des médicaments cytotoxiques. La, P-gp est aussi exprimée physiologiquement dans les tissus sains et notamment au niveau de la face apicale des cellules épithéliales de l'intestin. Ainsi, la biodisponibilifé par voie orale de nombreux médicaments peut être affectée négativement par la P-gp qui agit comme une pompe rejetant les xénobiotiques dans la lumière intestinale.Dans ces travaux, nous avons recherché les interactions potentielles de grandes familles d'excipients pharmaceutiques avec la P-gp à l'aide du modèle in vitro du sac d'intestin éversé de rat. Dans cette technique, la muqueuse d'un intestin de rat, et donc la P-gp présente au niveau apical des cellules épithéliales, est mise au contact d'un milieu d'incubation renfermant une molécule de référence (la digoxine ou le céliprolol) substrat de la P-gp en absence ou en présence d'agent modulateur. Plus de vingt molécules ont été testées dans ce modèle. Leur éventuelle toxicité a été déterminée en mesurant la libération d'une enzyme marqueur, la lactate-déshydrogénase. Les composés entraînant une augmentation du passage de la digoxine ou tau céliprolol sans effet toxique ont été choisis pour mener une étude in vivo chez le rat. Pour les études in vivo, l'objectif a été de comparer les proportions absorbées et les cinétiques plasmatiques obtenues chez le rat après administration par voie orale du substrat de la P-gp (digoxine ou céliprolol) seul ou associé aux excipients sélectionnés. Les résultats de ces travaux montrent que les excipients peuvent moduler l'activité de la P-gp quand ils sont solubles en milieu aqueux, et qu'As présentent des liaisons esters, une chaîne carbonée en C10 environ et des groupements polyoxyéthylènes. Certains auxiliaires de fabrication peuvent donc agir non seulement sur la mise à disposition du principe actif mais aussi sur des systèmephysiologiques limitant leur entrée au niveau intestinal. Cette notion peut revêtir une importance particulière lors de la formulation d'un médicament générique qui peut différer du princeps mais qui ne doit pas entraîner de changement de la réponse in vivo.

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